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分子筛层析法原理详解(分子筛层析如何分离蛋白质)
来源: | 作者:山东众智发环境科技有限公司 | 发布时间: 2021-12-20 | 537 次浏览 | 分享到:

什么是层析

层析基于不同物质在活动相和固定相之间的分配系数不同而将混合组分别离的技能。当活动相(液体或气体)流经固定相(多孔的固体或掩盖在固体支持物上的液体)时,各组分因沿固定相移动的速度不同而别离。该技能可用于微量样品的剖析和大量样品的纯化制备。

分子筛层析法原理(分子筛层析如何分离蛋白质)

层析(chromatography)也称色谱法。基于被别离物质分子在两相(一为固定相,一为活动相)中分配系数的细小差别进行别离,是一种多级别离技能。当两相做相对移动时,被测物质在两相之间进行重复屡次别离,使原来细小的分配差异进一步扩大,使各个组分别离。这一别离方法效率高、效果好,能将各种性质极相似的物质彼此别离。

层析(chromatography)可分为多品种型。依据移动相品种的不同,分为液体层析(chromatography)、气体层析(chromatography)两种。用作固定相的有硅胶、活性炭、氧化铝、离子交换树脂、离子交换纤维等,或是在硅藻土、纤维素等无活性的载体上附着适当的液体,也可使用其他物质。

层析(chromatography)是蛋白质别离纯化的重要手法之一。一般来说,待别离蛋白质溶液(活动相)经过一个固态物质(固定相)时,依据溶液中待别离的蛋白质颗粒巨细、电荷多少以及亲和力如何等,使待别离的蛋白质溶液在两相中重复分配,并以不同速度流经固定相而达到别离蛋白质的意图。

分子筛层析又是什么,以及分子筛层析的工作原理

分子筛层析又是什么,以及分子筛层析的工作原理

在蛋白质别离纯化中,使用最广的层析法是离子交换层析和分子筛层析。

一、离子交换层析。蛋白质和氨基酸相同,是两性电解质,在某一特定pH时,各蛋白质的电荷量以及性质不同,能够通过离子交换层析得以别离。

二、分子筛层析。又称凝胶过滤或体积排阻层析。层析柱内填满带有小孔的颗粒,一般由葡聚糖制成。蛋白质溶液加于柱之顶部,任其往下渗漏,小分子蛋白质进入孔内,因而在柱中滞留时间较长,大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出,因此不同巨细的蛋白质得以别离。

分子筛层析是使用有必定孔径规模的多孔凝胶作为固定相。对混合物中各组分按分子巨细进行别离的层析技能。具有分子筛效果的物质许多,如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。以葡聚糖凝胶使用最广,商品名是sephadex类型许多,从G10到G200,它的首要使用规模是:

①分级别离各种抗原与抗体;

②去掉复合物中的小分子物质。如除盐、荧光素和游离的放射性同位素以及水解的蛋白质碎片;

③剖析血清中的免疫复合物;

④分子量的测定。

分子筛层析柱的选择一般依据别离样品的品种和样品的数量而定。纯化蛋白质时,柱床体积应为样品体积的25~100倍。去盐、游离荧光素约为样品体积的4~10倍。柱太短,影响别离效果。柱长一些,别离效果好,但柱太长,则延长别离时间,样品也稀释过度。分子筛层析柱的内径也要选择适当。内径过细,会产生“器壁效应”,即靠近管壁的流速要大于中心的流速影响别离效果。所以分子筛层析柱的内径和高度应有必定的份额。对于除盐来说应为1︰5~1︰25;对于纯化蛋白质来说应为1︰20~1︰100。

分子筛层析的装柱进程基本同离子交换层析柱。